Principiul de bază al sintezei ADN-ului

Sinteza chimică a ADN-ului se bazează pe strategia de sinteză în fază solidă și pe chimia fosforamiditelor.Spre deosebire de sinteza ADN-ului biologic, materialul din sinteza ADN-ului chimic este DMT (4, 4-dimetoxitritil) și deoxiriboxizidă modificată cu fosforamidit, așa cum se arată în Figura 1. Sinteza ADN-ului se realizează pe suport solid (putem oferi diverseColoana de sinteză oligo), adică CPG (sticlă cu pori controlați) și PS (polistiren), iar întreaga sinteză se realizează pe unSintetizator ADN/ARN, care este echipamentul nostru principal, are modele diferite, cum ar fi: HY Single Channel Sintetizator, HY-12, HY-192 și etc, direcția de sinteză este de la 3’ la 5’, iar o nucleotidă este introdusă în suportul solid printr-un singur ciclu de sinteză.Un ciclu de sinteză de obicei conține patru pași, deprotejare, cuplare, plafonare și oxidare (Figura 2).Deprotecția este setată pentru a elimina gruparea DMT de pe suportul solid sau gruparea hidroxil 5’ de pe nucleozida anterioară, acidul tricloracetic 3% din diclormetan este utilizat ca reactiv de deprotecție.Apoi, deoxiriboxizida modificată cu fosforamidit a fost lăsată să expună gruparea hidroxil cu asistența activatorului, adică 5-etiltiotetrazol sau 4,5-dicianoimidazol, formând fosfitetriesterul (III) și a realizat etapa de Cuplare.O etapă de acoperire este efectuată pentru a bloca gruparea hidroxil nereacționată în timpul etapei de cuplare, pentru a minimiza formarea secvențelor de defecte nedorite.În cele din urmă, fosfittriesterul instabil (III) este oxidat la fosfortriester chimic stabil (V) cu iod ca oxidant în prezentul de piridină.

ADN-ul sintetizat ar putea fi scindat din suportul solid prin aminoliză, gruparea 2-cianoetil protejată de pe fosfortriester și amida de pe nucleobază este scindată în același timp, plăcile de sinteză și coloanele de sinteză din rafturi sunt plasate direct în camera de reacție. alEchipament de deprotejare.ADN-ul brut poate fi preparat prin HPLC, electroforeză și OPC la cerere, vă putem oferi șiEchipament de purificarepentru Post-procesare.