În sinteza tipică a ADN-ului, ARN-ului și acizilor nucleici nenaturali, etapa Deprotejare și Cuplare joacă un rol crucial.
Etapa de deprotejare este de a îndepărta gruparea DMT de pe suportul solid sau gruparea hidroxil 5' de pe nucleozida anterioară cu acid organic și expus gruparea hidroxil pentru următoarea etapă de cuplare.Acidul tricloracetic 3% din diclormetan sau toluen este utilizat în principal pentru a efectua etapa de deprotejare.Concentrația de acid tricloracetic și timpul de deprotecție (timp de deblocare) domină puritatea produselor finite.Concentrația scăzută și timpul de deblocare insuficient lasă gruparea DMT nereacționată, care scad randamentul și cresc impuritățile nedorite.Timpul lung de deblocare poate duce la depurina secvențelor sintetizate, formând impurități neașteptate.
Etapa de cuplare este sensibilă la conținutul de apă al solvenților și la umiditatea din aer.Concentrația de apă în sinteză ar trebui să fie mai mică de 40 ppm, mai bine mai puțin de 25 ppm.Pentru a menține starea de sinteză anhidră, sinteza acizilor nucleici trebuie efectuată într-un mediu cu umiditate scăzută, așa că recomandăm clientului nostru să foloseascăEchipamente de amidite dizolvate, care poate dizolva fosforamiditul sub formă de pulbere sau uleios în acetonitril anhidru pentru a evita contactul cu aerul.
Deoarece dizolvarea fosforamidiților este mai bună în situația fără apă și capcanele moleculare pentru a absorbi urmele de apă în reactivi și amidite, este necesar să se pregăteascăCapcane moleculare.Vă recomandăm 2 g de sită pentru sticle de reactiv de 50-250 ml, 5 g pentru sticle de reactiv de 250-500 ml, 10 g pentru sticle de reactiv de 500-1000 ml și 20 g pentru sticle de reactiv de 1000-2000 ml.
Dizolvarea fosforamiditelor trebuie efectuată în atmosferă inertă, iar înlocuirea reactivilor activatori și a acetonitrilului ar trebui să se termine la timp.Reactivii de acoperire și oxidare trebuie utilizați cât mai curând posibil, reactivii desfăcuți oferă o perioadă de valabilitate mai mică și o activitate mai mică în timpul sintezei.
Ora postării: august-09-2022