Principiile sintezei acizilor nucleici

Sinteza acidului nucleic este efectuată utilizând metoda trigliceridei cu amidă sialică în fază solidă, prin care capătul 3′ al ADN-ului este imobilizat pe un substrat în fază solidă și se adaugă nucleotidele în direcția 3′ până la 5′ până când fragmentul de ADN dorit este sintetizat. .Aceasta diferă de sinteza ADN-ului prin aplicarea ADN polimerazei.

Capătul 3′ al primei baze este imobilizat pe CPG în timpul sintezei, 5′-OH al bazei următoare este protejat cu di-p-tolil tritil DMT, gruparea amino de pe bază este protejată cu acid benzoic iar 3′ -OH este apoi activat cu un compus aminofosfat.1 bază din 5 5′-OH din 1 bază și 3′-OH din următoarea bază formează o trigliceridă fosfit, care este apoi oxidată cu iod la o trigliceridă fosfat, protectorul de pe a doua bază 5′-OH este îndepărtat prin adăugarea acidului dicloracetic DM se desfășoară prin adăugarea următoarei baze, iar după sinteză protectantul de pe 5′-OH este îndepărtat cu un acid slab. Fragmentul este deconectat de rășina solidă cu hidroxid de amoniu concentrat, protectorul este îndepărtat de la bază. cu hidroxid de amoniu concentrat sub încălzire, hidroxidul de amoniu este îndepărtat, fragmentul este uscat în vid, iar acidul nucleic este purificat prin cromatografie lichidă sau PAGE.

Etapele sintezei Oligo

Deblocare

TheGrupul de protecție al 5-lea DMT este îndepărtat prin adăugarea de soluție de TCA.

Activare

Amestecarea activatorului cu monomerul oligonucleotidic pentru a forma intermediarul monomer oligonucleotidic activ.

Cuplare

Gruparea hidroxil 5-terminală reacționează cu intermediarul oligonucleotid activ într-o reacție de condensare anti-generativă pentru a forma o legătură instabilă de trigliceridă fosfit.

Plafonare 

Adăugarea unui agent de acoperire realizează o reacție de acoperire de acetilare cu grupări hidroxil în exces care nu sunt implicate în reacția de condensare.

Oxidare 

Adăugarea de soluție de iod care conține apă reacționează cu legături instabile de fosfit prin oxidare pentru a forma legături trigliceride stabile ale acidului fosforic.

Scindarea cianoetilului

Produsul de acid nucleic după sinteză, cu adăugarea de soluție de DEA pentru a îndepărta gruparea cianoetil din legătura fosfat trigliceridă.

Cleaved&Deprotection

Fragmentele de acid nucleic sunt scindate din purtătorul în fază solidă prin adăugarea unei soluții concentrate de hidroxid de amoniu și apoi încălzite pentru a îndepărta grupările protectoare din legăturile de hidrogen ale bazelor.